Laboratorní diagnostika stafylokoků
40 druhů, kataláza pozitivní, fakultativní anaerob
Druh: Stahpylococcus aureus - patogenní
Klinika:
Invazivní infekce:
- Hnisání ran
- Sepse
- Mastitidy
- Osteomyelitidy
Toxinozy:
- Stafylokoková enterotoxikoza
- Syndrom toxického šoku
Druh: Stahpylococcus epidermidis - nepatogenní, kolonizace kůže
Mikroskopicky:
G+ koky ve shlucích
Kultivačně: nenáročné
KA - bílé bez hemolýzy 2mm velké = Stahpylococcus epidermidis
- žluté s hemolýzou = Stahpylococcus aureus
slaný agar s manitolem ( sůl = selekce, manitol = zkvašování, ind. Fenolová červeň)
- beze změny půdy ( červená) = Stahpylococcus epidermidis
- změna na žlutou = Stahpylococcus aureus
MH - citlivost
Diferenciální diagnostika:
- katalázový test = odlišení od jiných koků(streptokoky)
Diagnostické testy = rozlišení Stahpylococcus epidermidis a Stahpylococcus aureus:
- Tvorba plasmakoagulázy (PK)
- Tvorba DNAáza
- Latexová aglutinace
- Určení biochemických vlastností - Staphytest
Katalázový test:
• Použití: pozitivní, např. u Staphylococcus sp., Enterobacteriaceae; negativní, např. u Streptococcus sp.
• Princip: peroxid vodíku je rozkládán katalázou za vzniku kyslíku a vody.
• Postup: na podložní sklíčko naneseme kapku 3 % peroxidu vodíku, umělou kličkou nabereme část kolonie testované kultury a zamícháme s kapkou peroxidu.
• Hodnocení: pozitivní výsledek: okamžitá reakce s výraznou tvorbou bublinek; negativní výsledek: reakce s tvorbou bublin neprobíhá.
Plazmakoagulázový test:
Průkaz volné plazmakoagulázy - do 0,5 ml 10x ředěné králičí plazmy nebo StaphyloPK v aglutinační zkumavce se suspenduje několik kolonií testovaných stafylokoků. Zkumavky umístíme do termostatu 37o C . Hodnotíme za 1,2 a 24 hodin.
Hodnocení: za pozitivní reakci se považuje vytvoření koagulátu do 24 hodin.
Latexová aglutinace:
• Použití: pozitivní u Staphylococcus aureus; negativní u jiných stafylokoků.
• Princip: vázaná koaguláza (clumping factor) je vázaná na buněčnou stěnu Staphylococcus aureus. Částice latexu mohou být potaženy nejen fibrinogenem, substrátem pro vázanou plazmakoagulázu, ale současně i dalšími látkami zvyšujícími specificitu testu, např. imunoglobulinem IgG, jenž prokazuje protein A - specifický pro Staphylococcus aureus, nebo protilátkami vůči polysacharidům v buněčné stěně Staphylococcus aureus.
• Postup: na kartičku dodávanou s testem kápneme latexovou suspenzi, nabereme na kličku kolonii a smícháme ji s kapkou latexové suspenze, pak krouživými pohyby mícháme.
• Hodnocení: pozitivní výsledek: tekutina se vyčeří za vzniku shluků sraženin; negativní výsledek: tekutina zůstává mléčně zkalená.
Staphytest:
• Použití: k druhové identifikaci bakterií
• Princip: jde o kombinaci různých testů např. na mikrodestičce, kde jsou po naočkování a inkubaci vidět v jednotlivých jamkách barevné změny; jednotlivé kombinace testů pozitivních a negativních mají od výrobce deklarováno, s jakou pravděpodobností se jedná o určitý druh bakterie; tyto informace jsou dodány formou katalogu nebo počítačového programu.
• Postup: destičku inokulujeme suspenzí bakterií o předepsané intenzitě zákalu a v příslušném množství do každé jamky, inkubujeme obyčejně od několika hodin do 24 hodin při 37 °C.
• Hodnocení: vizuální odečet podle barevné předlohy od výrobce, vyhodnocení testů (pozitivní/negativní) zapisujeme do předepsaného formuláře. Zde vytvoříme dle předepsaného postupu číselný kód. Kód zapisujeme do diagnostického počítačového programu, proběhne vyhodnocení s určením druhu bakterie, který je svým biochemickým profilem nejbližší testovanému kmenu. Kód lze také vyhledat ve firemním katalogu, kde jsou uvedeny nejpravděpodobnější druhy bakterií pro danou kombinaci testů, ze kterých obyčejně považujeme bakteriální druh s nejvyšším procentním skóre jako nejvíce totožný s testovaným kmenem. Odečet testu lze provést i na přístroji, který automaticky vyhodnotí biochemický profil bakterie, srovná jej se svou databází v počítači a navrhne, o jaký druh bakterie se jedná i s jakou pravděpodobností.